Серологические реакции

Страница: 1/8

СЕРОЛОГИЯ - раздел иммунологии, изучающий взаимодействие АГ

и АТ в пробирочных реакциях (in vitro).

Серологические реакции - реакции с использованием АГ или АТ

(проводящиеся in vitro).

Серологическими методами (в диагностике инфекционных заболе-

ваний) называют совокупность пробирочных реакций, основанных на

АГ-АТ-взаимодействии. /2640к/99/

1) Направленны на выявление в сыворотке крови и других жид-

костях организма АТ к АГ возбудителей инфекционных болезней.

2) Проброчные реакции, имеющие целью обнаружение в сыворотке

крови и других субстратах растворимых микробных АГ с помощью

стандартных иммунных сывороток.

Серологические реакции проводятся с использованием

1) АГ для поиска АТ

2) АТ для поиска АГ

4+ 0 /?/ 4 IN VIVO (кожные пробы, РН in vivo ...)

4- серопрофилактика (введение АГ, АТ)

4В серологчиеские методы не входят реакции, которые ставят на

4людях или животных (реакция Шика, Дика), и серологическая иден-

4тификация культур микроорганизмов (это один из этапов бактерио-

4логического метода.

КЛАССИФИКАЦИЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

1. Двухкомпонентные

- простые (РА,РП)

-- розеточные тесты (РОК)

-- цитофлюоресцентные методы

- сложные (РН /гемадсорбции, токсина, ...,РТГА,РНГА, ре-

акция прямой имунофлюоресценции, реакции адгезии).

Реакции адгезии отличаются взаимодействием частиц, например,

клетки, с серологически активной поверхностью, в т.ч. с другой

клеткой. /2260к/

2. Трехкомпонентные

- простые

-- реакция бактериолиза,

-- реакция коагглютинации

- сложные

-- реакция непрямой иммунофлюоресценции,

-- РИА,

-- РЭМА,

-- литические тесты (РСК, определение АОК с помощью

эритроцитарных АГ-ов),

-- использование электронного парамагнитного и ядер-

но-магнитного резонанса) /7271/87/,

Материал для серологических реакций:

- сыворотка крови (парные сыворотки). Заморозка в течение

10-14 дней.

- ликвор,

- моча,

- фильтрат испражнений,

- промывные воды бронхов, полости рта, глотки, носа /2640к/,

желудка.

- Слизь (шейки матки, ... - здесь АТ порой больше, чем вы сы-

воротке)

Учет серологических реакций осуществляется видуально, иногда

с помощью лупы и редко - микроскопа. /2640к/99/

При оценке серологических реакций применяют 3 главных крите-

рия /2640к/99/:

- наличие и интенсивность реакции (в плюсах и др.),

- диагностический титр, заранее отработанный для всех забо-

леваний,

- нарастание титра АТ в течение болезни в 4 и более раза.

В процессе оценки серологических реакций часто возникает не-

обходимость дифференцировки

1) специфической реакции (на видовые и типовые антигены) от

группоспецифической (на межвидовые АГ) [Группоспец. АГ

Salm. - табл.]

4-- дифференцировка по моноспецифическим антисывороткам,

4-- по скорости нарастания титра АТ, которая выше к специ-

4фическим АГ, 0

4-- по реакции адсорбции АТ избытком антигена

4-- по легкости диссоциации ИК под влиянием диссоцирующих

4факторов 0

2) ИО на текущую инфекцию от ИО на перенесенное ранее заболе-

вание и иммунизацию. /2640к/99/

5-- Оценивают по темпу нарастания АТ.

При постановке любой серологической реакции параллельно с

опытом ставятся _контроли на каждый компонент реакции .:

- микробная культура не должна образовывать хлопья при ана-

логичном встряхивании;

- сыворотка и антисыворотка не должны быть с хлопьями

(хлопья появляются в процессе хранения белков в связи с посте-

пенным оголением углеводных компонентов; углеводные компоненты

белков, будучи жесткими разветвленными структурами, "запутыва-

ются друг в друге", обуславливая агрегацию белков);

- эритроциты не должны быть лизированы;

- сыворотка морской свинки, используемая как источник комп-

лемента, должна лизировать эритроциты (т.е. работать): компле-

мент + ЭБ --- лизис;

- диагностикум не должен содержать хлопьев и пр.

- при поиске АГ обязательно используется параллельно музей-

ный АГ, который должен однозначно выявляться при проведении ме-

тодики (это значит, что все компоненты реакции "работают", ме-

тодика поставлена правильно).

3РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ /РА/

РА - реакции склеивания микробов, частиц латекса или эрит-

роцитов /реакция гемагглютинации - РГА/. АГ-несущие частицы

склеиваются антителами и выпадают в видимый осадок.

1Титром сыворотки 0 считают максимальное разведение, дающее

агглютинацию АГ.

┌ ┐

0 0 0 0 0 = │ 0 0 │

\ / \ / \ / \ / \ / \ / │\ / \ / \ /│

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

└ ┘n

0 - клетка

>── - молекула антитела

1) _ 2Прямая РА

В этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглю-

тинируют корпускулярные АГ (агглютиногены).

- 1Зернистая 0 агглютинация происходит при склеивании микробов,

содержащих О-антиген.

- 1Хлопьевидная 0 агглютинация происходит с бактериями, имеющи-

ми жгутики (Н-антигены).

а) 2Прямая реакция агглютинации (РА)

- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле)

1Постановка реакции:

│Микробная суспензия

│+ антисыворотка к микробу

1Результат: 0 - хлопья (агглютинаты)

5Для определения микробного вида (серотипирования) на пред-

5метное стекло наносится 1 капля (0,05мл) диагностической сыво-

5ротки, разведенной физиологическим раствором 1:25. На вторую

5половину стекла наносится капля физиологического раствора

5(контроль). К каждой капле добавляется равный объем испытуемой

5культуры.Слегка покачивая стекло, наблюдать за течением реак-

5ции: феномен агглютинации проявляется выпадением хлопьев и

5просветлением жидкости в капле. В контроле микробная культура

5должна остаться мутной и гомогенной. 0

- _Развернутая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для

раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)

1Постановка реакции:

│Сыворотка больного, содержащая АТ к микробу --- рас-

│ титровка

│+ микробная суспензия (равное количество во все про-

│ бирки или лунки

1Результат: 0 - хлопья (агглютинаты) микробов

5Для определения антител в сыворотке крови больного поста-

5вить в штатив 7 пробирок и налить в каждую из них по 0,5 мл фи-

5зиологического раствора. Добавить в первую пробирку 0,5 мл сы-

5воротки больного, разведенную в 50 раз, перемешать. 0,5 мл из

5первой пробирки перелить во вторую, перемешать; из второй про-

5бирки 0,5 мл перелить в третью и т.д. Из последней пробирки вы-

5лить для равенства объемов 0,5 мл в банку с дезраствором.В каж-

5дую пробирку добавляют по 2 капли антигена или диагностикума.

5Оформить 2 контроля - контроль антигена (для исключения спон-

5танной агглютинации) и контроль сыворотки в исходном разведении

51:50.

5Рабочая схема РА:

5──────────────────────────────────────────────────────────────

5Ингредиенты │ Ряд пробирок

5│------------------------------------------------

5│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7

5──────────────────────────────────────────────────────────────

51. Физраствор 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 - 0,5

52. Сыворотка 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

5больного 1:50

5Полученные

5титры 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:50 -

53. Диагнос-

5тикум в

5каплях 2 2 2 2 2 - 2

5Инкубация в термостате 2 часа при 370С, затем при

5необходимости 24 часа при комнатной температуре.

5Учет результатов реакции проводят через 24 часа по следующей

5схеме:

5++++ полная агглютинация, жидкость прозрачная, выраженный

5осадок;

5+++ жидкость слегка опалесцирует, но осадок хорошо выражен;

5++ или + сомнительная реакция, жидкость равномерно мутная,

5осадок отсутствует. 0

5- отрицательная реакция, жидкость равномерно мутная,

5осадок отсутствует.

5Титром агглютинирующей сыворотки считается то ее максималь-

5ное разведение, при котором еще происходит реакция не менее,

5чем на три плюса.

5Артефакты:

5- наличие СРБ, агглютинирующего микробы (стафилококки,

Реферат опубликован: 15/06/2005 (17523 прочтено)