Диагностика стафилококковых инфекций

Страница: 1/3

Предисловие

Несмотря на то, что стафилококки принадлежат к числу наиболее легко обнаруживаемых и распозна­ваемых микроорганизмов, не требующих сложных диагностических приемов для их выявления, в прак­тической работе микробиологи до сих пор испыты­вают определенные трудности при установлении их причинной роли в ряде различных заболеваний. С од­ной стороны, присутствие патогенных стафилококков, обнаруживаемое в исследуемом материале, не всегда является убедительным доказательством их этиоло­гического значения. С другой, учитывая большое разнообразие проявлений биологической активности этих микробов, зависящее от разных, не всегда под­дающихся учету факторов, широкую их изменчивость под влиянием лекарственных веществ и самого мак­роорганизма, довольно сложно бывает определить их потенциальную патогенность. Наконец, третья причи­на связана с тем, что стафилококки являются пред­ставителями нормальной микрофлоры из группы условно патогенных микроорганизмов и, наряду с не­патогенными, патогенные представители обитают в организме людей, распространяясь при этом весьма неравномерно на разные участки человеческого тела.

Если выделение патогенного стафилококка, из кро­ви больных людей и различных полостей, которые принято считать стерильными, в подавляющем боль­шинстве случаев может служить доказательством его роли как возбудителя болезни, то присутствие ста­филококков на слизистых зева, носа и т. д. даже при явном болезненном состоянии их требует большой осторожности исследователя в выводах об этиологии данных заболеваний.

Поэтому, естественно, не может быть общих ре­комендаций, как при диагностике различных стафи­лококковых инфекций, так и при микробиологических исследованиях участков тела человека и разных объ­ектов внешней среды. Широкий обмен мнениями между микробиолога­ми научных учреждений и практических лаборато­рий, осуществляемый на съездах и конференциях, посвященных проблемам стафилококковых инфекций, а также при личных контактах, казалось бы, должен был привести к определенным взглядам на различ­ные методы исследования, предлагаемые для выде­ления и идентификации стафилококков. Однако боль­шое число запросов, поступающих из лабораторий СЭС и лечебных учреждений, свидетельствует о яв­ных затруднениях, которые возникают у исследова­телей при решении разных вопросов микробиологи­ческой диагностики стафилококков, а в ряде микро­биологических учреждений бытуют еще некоторые устаревшие методы и приемы, приводящие к непра­вильным оценкам и даже досадным недоразумениям.

Важным условием эффективности лабораторной диагностики является сочетанное определение каче­ственных и количественных критериев содержания патогенных стафилококков в исследуемом материале. Исходя из этого, я считаю необходимым изложить ряд методов основных микробиологических исследо­ваний, наиболее простых и доступных для каждой практической и научной лаборатории, которыми мы пользуемся в течение многих лет.

ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ОБНАРУЖЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ СТАФИЛОКОККОВ

Предварительная диагностика стафилококков мо­жет основываться на бактериоскопическом изучении препаратов — мазков, окрашенных по Граму. Пато­генные стафилококки, помимо гроздевидного распо­ложения, характеризуются правильной сферической формой клеток. Обнаружение стафилококков, нахо­дящихся внутри клеток, позволяет дать ответ о на­личии стафилококковой инфекции. В большинстве же случаев для точного установления патогенности об­наруженных стафилококков требуется выделить эти микроорганизмы в чистой культуре путем посева исследуемого материала на плотные питательные среды.

В настоящее время ассортимент дифференциаль­ных, элективных и накопительных сред, предложен­ных для выделения патогенных стафилококков, весь­ма значителен и продолжает расширяться. Многие исследователи на основе знания основных биохими­ческих характеристик и питательных потребностей патогенных стафилококков при конструировании сред стремятся повысить их высеваемость и обеспечить возможность осуществлять их количественный учет, получить надежный способ отличать потенциально болезнетворные стафилококки от сапрофитов.

Употребление жидких накопительных сред для первичного выделения стафилококков нецелесообраз­но, так как лишает исследователя возможности количественной оценки содержания микробов в об­следуемых объектах, а при случайных загрязнениях способствует ошибкам. Особенно это относится к та­ким исследованиям, как обнаружение носительства патогенных стафилококков, где доказательством яв­ляется лишь массивный рост, либо определение этио­логической роли этих микроорганизмов "при пищевых отравлениях или наружных воспалительных процес­сах. Если же речь идет об исследовании крови, а так­же о тех немногих случаях, когда бывает необходимо выявить даже единичные жизнеспособные особи этих микробов, например при контроле эффективности дезинфекции, проверке на стерильность или титрационных посевах, то в подобных случаях ис­пользование накопительных сред вполне оправ­дано.

Из большого числа разнообразных питательных сред, опробованных для первичного выделения ста­филококков, в практике оправдал,;1' себя немногие. Обычный питательный агар (рН 7,2 7,4), приготов­ленный путем добавления 2% агар-агара к мясопептонному бульону или к триптическому перевару Хоттингера, может быть использован при исследова­нии экссудатов из закрытых полостей. Стафилококки вырастают через 18—24 ч инкубации при 37° С в виде гладких блестящих с ровными краями непрозрачных и слегка выпуклых колоний. Характер пигмента вы­является лучше после дополнительного суточного выдерживания чашек при комнатной температуре (20° С) на свету. Если в исследуемом материале при­сутствует посторонняя флора, то по внешнему виду колонии стафилококков могут быть трудно отличимы.

Употребление кровяного агара дает возможность, кроме выявления пигмента, определить и гемолитическую активность стафилококков. При этом необхо­димо помнить, что гемолитическая способность, определяемая на чашках с кровяным агаром, зависит от многих факторов — вида крови, ее концентрации, наличия в ней антитоксинов, толщины слоя среды, содержания углекислого газа в атмосфере культиви­рования, густоты посева, присутствия и характера со­путствующей флоры и т. д.

При отборе колоний с кровяного агара необходи­мо отвивать как гемолитические, так и не дающие гемолиза, особенно если исследование проводится на среде с человеческой или лошадиной кровью, а от­сутствие гемолиза на таких средах не позволяет за­ключить об отсутствии вообще гемолитической актив­ности. Поэтому использование кровяного агара для первичного посева целесообразно только при обсле­довании объектов, не содержащих посторонней мик­рофлоры, и желательно добавлять в питательную среду кровь кролика или барана.

Если же проводится исследование гноя открытых ран или отделяемого язв или свищей, то следует пользоваться элективно-дифференциальной средой для стафилококков — желточно-солевым агаром (ЖСА) Г. Н. Чистовича. Элективность этой среды обеспечивается высоким содержанием хлористого натрия, а добавленный яичный желток позволяет вы­являть лецитовителлазную активность, которая является одним из показателей патогенности стафило­кокков и в силу этого ЖСА более четко дифференци­рует патогенных представителей, чем кровяной агар. Приготовление ЖСА несложно.

Заготовляют впрок и стерилизуют в автоклаве при 120 °С" в течение 20 мин питательный агар (МПА или Хоттингера) рН 7,2—7,4, содержащий 10% поваренной соли. Перед употреблением солевой питательный агар растапливают, остужают до 45—50 °С и добавляют к нему 20% по объему стерильной желточной взве­си (1 желток куриного яйца на 200 мл физиологического рас­твора). Для лучшего эмульсирования желательно иметь колбы со стеклянными бусами. После тщательного перемешивания среду разливают по 20—25 мл в чашки, которые могут храниться в хо­лодильнике в течение нескольких дней.

Следует производить массивный посев исследуе­мого материала на чашки с ЖСА, а инкубацию вести в течение 2 суток при 35—37° С. Посторонняя флора резко подавляется, стафилококки же на ЖСА выра­стают практически в чистой культуре. Непосредст­венно при просмотре чашек вокруг колоний отме­чается образование радужных венчиков и мутной зоны — лецитовителлазная реакция. Такие колонии, не менее двух из каждого посева, отвивают на скошенный мясо-пептонный агар для последую­щей проверки выросших культур в реакции плазмо-коагуляции.

Чтобы избежать ошибок в определении желточ­ной реакции, необходимо иметь в виду, что иногда наблюдается помутнение среды без радужного обод­ка, в этом случае проба на лецитовителлазу считает­ся отрицательной. Если же колонии, выросшие на ЖСА, не дают лецитовителлазной реакции, т. е. не окружены радужным венчиком, но имеется рост ста­филококков, то их тоже считают подозрительными и также отвивают не менее двух из каждого такого посева на чашки с простым питательным агаром пятнами диаметром 5—10 мм. После суточного инкубирования при 37° С полученные макроколонии про­веряют в реакции плазмоагглютинации, для чего микробную массу размешивают петлей на стекле в каплях цитратной кроличьей или человеческой плаз­мы, разведенной 1 :4. Образование хлопьев учиты­вают в течение 30с—1 мин. При наличии плазмоаг­глютинации такие штаммы считают подозрительными и отвивают на скошенный агар для дальнейшего изу­чения в коагулазной реакции. При таком отборе число пропускаемых штаммов патогенных стафило­кокков человеческого происхождения невелико, куль­туры же, выделенные от животных, требуется прове­рять в реакции плазмокоагуляции.

Коагулазная проба является основным признаком, определяющим болезнетворность стафилококков, по­этому ее постановка требует к себе максимального внимания. Для выявления коагулазной активности у стафилококков, выделенных от людей, можно поль­зоваться как цельной кровью, так и плазмой кроли­ков или человека. Можно использовать также кровь или плазму, взятую непосредственно от человека. Консервированная плазма или кровь, используемые для переливания, непригодны для реакции, так как к ним часто добавляются консерванты, которые пре­пятствуют жизнедеятельности стафилококков, прояв­лению коагулазной активности. Не следует приме­нять кровь животных или людей, переносящих стафи­лококковые заболевания, в особенности затяжные, так как она может оказаться нестерильной и содержать антикоагулазу. При работе со стафилококками, выде­ленными от рогатого скота, можно пользоваться бы­чьей кровью.

Реферат опубликован: 8/04/2005 (4387 прочтено)