Страница: 2/8
5стрептококки)
5- наличие перекрестных антигенов
б) 2Прямая реакция гемагглютинации (РГА)
- вирусами (эритроцитов любого вида животного)
- при смешивании двух разногруппных проб крови (определе-
ние групп крови)
1Постановка реакции:
│Субстанция, склеивающая эритроциты (сыворотка, вирусы)
│+ эритроциты --- хлопья
1Результат: 0 - хлопья (означают присутствие АТ)
1Варианты постановки:
- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле)
- _Развернутая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для
раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)
5Материал с вирусом титруют от 1/10 до 1/1280. 0,5мл данного
5материала смешивают с 0,5мл 1-2% эритроцитов. Инкубируют 30 ми-
5нут при 37оС или 45 минут при комнатной температуре. Титром ви-
5руса считается его наибольшее разведение, при котором наблюда-
5ется агглютинация эритроцитов.
5Прямая гемагглютинация, вызываемая бактериями, коррелирует с
5их способностью прикрепляться к клеткам макроорганизма, отража-
5ет вирулентные свойства. (Предложен метод селекции наиболее ак-
5тивных клеток из культуры путем их адсорбции на эритроцитах с
5последующим высевом на плотные среды.)-[11ц301-81]
2) _ 2Непрямая РА
= 2РНГА (РПГА 0; РНГА=РПГА 2) (реакция пассивной 0 2или 0 2непрямой ге-
2магглютинации)
1Варианты постановки:
- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле)
- _Развернумая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для
раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)
┌ ┐
│ .0. .0. │
│\ / \ / \ /│
│ │ │ │ │
└ ┘n
К носителю (эритроцитам, стафилококку, частицам латекса /ла-
текс-агглютинация/ и пр. химическим способом "пришивают" анти-
гены, ампулируют и выпускают в биотехнологической промышленнос-
ти как диагностикумы.
1Постановка реакции:
│Сыворотка больного --- раститровка
│+ диагностикум в каждую лунку ---
1Результат: 0 - "зонтик" (реакция агглютинации есть),
- "пуговка" (РА нет)
Последняя ячейка с положительной пробой ("зонтиком") означа-
ет титр АТ.
5Сорбция на носителе либо АГ (РНГА=РПГА), либо АТ (обратная
5РПГА).
5Реакция ставится в двух вариантах. Антиген (РПГА) или анти-
5тела (РНГА) связываются с крупным носителем с последующим выяв-
5лением уровня специфических иммуноглобулинов или антигена.
5Исследуемый антиген "сшивается" танином или глютаровым ди-
5альдегидом с эритроцитами или частицами латекса.
5Сыворотка больного, прогретая 30 минут при 56оС, раститровы-
5вается (0,5мл) и смешивается с 2 каплями эритроцитарного диаг-
5ностикума.
3) _ 2Проба Кумбса . 0 (непрямая пассивная гемагглютинация;
антиглобулиновый тест)
Для постановки этой реакции необходима антиглобулиновая сы-
воротка, которую получают путем иммунизации кролика иммуногло-
булинами человека.
Используется для определения неполных (функционально однова-
лентных) антител, например, "ро"-антител к эритроцитам плода
при резус-конфликте, ряд аутоантител, АТ к некоторым микробам и
пр. Эритроциты плода в условиях in vivo не агглютинируют, одна-
ко при обработке их in vitro антисывороткой к гамма-фракции ан-
тител человека происходит РА на стекле (= _ориентировочная . реак-
ция Кумбса). К сыворотке добавляется антиген (резус-фактор) и
затем антисыворотка против гамма-глобулинов, что вызовет агглю-
тинацию загруженных эритроцитов. _Развернутая . реакция Кумбса (в
ряду пробирок или лунок) применяется для определения титра цир-
кулирующих неполных антител в сыворотке больного.
┌ ┐
│ 0 0 │
│ \ / \ / \ / \ / -АТ 41 0│
│ │ │ │ │ │
│ \ / \ / \ / │
│ │ │ │ │
│ АТ 42 0 АТ 42 0 АТ 42 0 │
└ ┘n
1Постановка реакции:
│Сыворотка (АТ 41 0) --- раститровка
│+ эритроциты (с Rh-антигеном)
│+ антисыворотка к Fc-фрагменту Ig G (АТ 42 0).
1Результат: 0 - "зонтик" (реакция агглютинации есть),
- "пуговка" (РА нет)
Последняя ячейка с положительной пробой ("зонтиком") означа-
ет титр АТ.
4) _ 2Реакция коагглютинации 0 2(РКОА 0, РКА 2)
1Варианты постановки:
- _Ориентировочная РА . (на предметном стекле) --- хлопья
- _Развернумая РА . проводится в ряду пробирок или лунок для
раститровки сыворотки больного (определения титра АТ)
L[+]
┌ │ ┐
│ ┌─┴─┐ 4 0 │
│ 0> 4── 0┤St.├ 4─ 0─<0│
│ └─┬─┘ 4 0 │
│ │ │
└ ┘n
К носителю - клеткам инактивированного золотистого стафило-
кокка (Staphylococcus aureus), несущего на своей поверхности
белок А (функциональный аналог FcR) добавляют необходимые АТ
(антисыворотку) и после инкубации - исследуемую жидкость с
предполагаемыми АГ-ми.
1Постановка реакции:
│Стафилококковый диагностикум
│+ АГ
1Результат: 0 - "зонтик" (реакция агглютинации есть),
- "пуговка" (РА нет)
Последняя ячейка с положительной пробой ("зонтиком") означа-
ет титр АТ.
5Реакция Ко-агглютинации (РКА) предложена в 1973г. Kronvall
5для постановки диагноза пневмококковой инфекции. Сейчас она ис-
5пользуется для диагностики эшерихиозов, коклюша, менингококко-
5вой, стрептококковой инфекции, сальмонеллезов и шигеллезов, а
5также для обнаружения некоторых бактериальных токсинов.
5/2119к/85/
5Реакция пригодна для идентификации различных антигенов путем
5агглютинации стафилококков, сенсибилизированных антителами про-
5тив детерминант бактериальной, вирусной или неинфекционной при-
5роды. /2111к/
5Например, для индикации шигелл зонне в молоке, кефире и в
5материалах от людей. Для определения чувствитель-
5ности РКОА ставили с 10-кратными разведениями 1 млрд. микробной
5взвеси шигелл Зонне. Чувствительность РКОА составила 108-109
5микробных тел в 1 мл взвеси. /2111к/
5Стафилококковый реагент выпускается Ленинградским НИИЭМ им.
5Пастера и используется его 2% взвесь. Для сенсибилизации ис-
5пользуются сыворотки с титром антител в РПГА не ниже 1:12800.
5/2111к/
5На предметное стекло капают 2 капли по 0,1 мл диагностикума
5и испытуемый материал. Положительным результатом считалось об-
5разование агглютината с полным просветлением смеси. (Контроль -
5с физраствором и реакция с заведомо инфицированным материалом.)
4Определение энтеротоксина в реакции
4коагглютинации
4Культуру сальмонелл осаждают (8000 об./мин.;20 минут), к
4осадку микробов добавляют 0,5 мл дистиллированной воды, готовят
4лизат, вновь центрифугируют (8000 об./мин.;20 минут) и с надо-
4садком (супернатантом) проводят реакцию. /1804к/88/
4В реакции используют диагностикум - золотистый стафилококк с
4"пришитыми" к нему антителами к токсину. 2-3 капли реагента + 1
4капля супернатанта культуры сальмонелл больного --- РА (оценка
4+, ++, +++, ++++ после 3-минутного покачивания). /1804к/88/
5) _ 2РТГА (реакция торможения гемагглютинации)
Гемагглютинин (НА) вирусов заблокирован антителами (первые
ячейки с " _пуговками ." = РА нет):
L[+]
┌ ┐
│ ┌───┐ ┌───┐ │
│ ──<0>── │Эр.│ ──<0>── │Эр.│ ──<0>── │
│ └───┘ 7 0 └───┘ │агглютинации
└ ┘эритроцитов
нет
0 - вирус (=торможение
>── - антитела агглютинации)
При "следовых" количествах антител к гемагглютитину (НА) или
их отсутствии гемагглютинин ("клей для эритроцитов") вирусов
остается "открытым" (не закрыт антителами) и происходит склеи-
вание эритроцитов (последние ячейки с " _зонтиками ." = РА есть):
L[+]
┌ ┐
│ ┌───┐ ┌───┐ │
│0│Эр.│0│Эр.│0│
│ └───┘ └───┘ │
└ ┘n
а) Определение титра АТ к определенному вирусу (добавляется
антисыворотка к НА /гемагглютинин видоспецифичен/ данного виру-
са).
1Постановка реакции:
│Сыворотка больного --- раститровка
│+ суспензия музейных инактивированных вирусов
│ (или диагностикум)
│+ эритроциты любого вида животного
Реферат опубликован: 15/06/2005 (23789 прочтено)