Страница: 9/10
комбинантного штамма (1-2 суток), отделение биомассы, разруше-
ние структур, ресуспендирование в буфере, ультрафильтрация, аф-
финная хроматография супернатанта на колонке с моноклональными
антителами, промывка колонки, срыв ИФ 2М NaCl-?, лиофильная
сушка и стандартизация.
3. Выделение из культуры лейкоцитов, фибробластов и других
клеток:
- 18 -
Схема получения: культуру клеток заражают одним из непато-
генных для человека виросов (вирусы Сендай, болезни Ньюкастля,
везикулярного стоматита), через сутки центрифугируют, надосадок
очищают аффинной хроматографией, ультрафильтрация (для удаления
вирусов-?), лиофилизация, стандартизация.
Длительное введение рекомбинантных ИФ стимулирует образова-
ние у 30% больных АТ к ИФ. Природные ИФ практически не иммуно-
генны. /7492/
Другие противовирусные ингибиторы - липопротеиды, мукопроте-
ин (альфа), подавляющие активность вирусов полиомиелита, клеще-
вого энцефалита, миксовирусов, подавляя адсорбцию вирусов к
клетке.
2VII. ЛИЗОЦИМ
Открыт Флемингом в 1922г.
_Биохимия
Это низкомолекулярный (М.15 кД) щелочной фермент - 1мурамида-
1за 0 (бета-глюкозаминидаза), гидролизирующий связь N-ацетилмура-
мовой кислоты и N-ацетилглюкозамина, содержащиеся в клеточной
стенке некоторых микроорганизмов (растворяет мукополисахариды).
/6528/89/ 4130 аминокислотных остатков.
_Синтез
Синтезируется фагоцитирующими клетками (моноцитами, макрофа-
гами, полиморфоядерными лейкоцитами), накапливаясь в гранулах и
лизосомах, затем поступает в плазму, синовиальные оболочки и
выделяется преимущественно со слюной, слезной жидкостью и моло-
ком. Высвобождение лизоцима из клеток кальций (Са 52+ 0)-зависимо.
_Функции
- Лизирует многие сапрофиты, например, Micrococcus lysodeic-
ticus, и некоторые патогенные бактерии, поврежденные антителами
и/или комплементом. Значение лизоцима как микробицидного факто-
ра невелико в связи с весьма ограниченным его антибактериальным
спектром, который включает в основном сапрофитные бактерии.
/350/84/ Антимикробное действие лизоцима распространяется глав-
ным образом на _Г+ кокки .. /7073/-? 4Кроме лизоцима микробицидную
4активность могут проявлять и другие гидролазы: аргиназа, глико-
4зидаза. /350/84/ 0 Лизоцим проникает до пептидогликанового слоя и
разрушает цитоскелетные элементы.
5- Лизоцим у крупного рогатого скота в преджелудках и у тра-
5воядных обезьян выполняет сходные функции в ферментации расти-
5тельной пищи в ЖКТ. /7959/87/
5- Фрагмент лизоцима Thr-Leu-Lys-Arg обладает иммуномодулиру-
5ющими свойствами (предположительно). /7960/87/ Лизоцим ингиби-
5рует лимфобластогенез и пролиферацию клеток в СКЛ. /7961/86/
Лизоцим способствует репаративным процессам. /7073/ Активирует
фагоцитоз и хемотаксис лейкоцитов. /7073/
_Содержание
Лизоцим содержится в слезах, крови, бронхиальном секрете,
молоке, курином белке и в икре разных рыб. Особенно много лизо-
цима в слюне животных (зализывание ран животными). Этим может
объясняться относительно легкая заживляемость ран и царапин в
ротовой полости, например, после удаления зуба). /293/
- В крови - 2 мг/л (порядка 1 мг/мл). При беременности у че-
ловека индуцируются большие количества лизоцима, который обна-
руживается в плаценте, матке, амниотической жидкости, семенной
плазме, цервикальной слизи. /7982/85/ В женском молоке лизоцима
в 100 тысяч раз больше, чем в коровьем.
- В слезной жидкости в 150 раз больше (устойчивость роговицы
особенно к кокковой микрофлоре; в отношении некоторых кокков
слеза действует в разведении в 10 млн раз /293/).
- Уровень лизоцима наиболее высок в сыворотке новорожденно-
го; держится на высоком уровне до 3 лет, затем с возрастом со-
держание падает.
- В куриных яйцах (лизоцим белка служит надежной защитой
против весьма опасной для него стафилококковой инфекции). /293/
Лизоцим полностью обусловливает бактерицидные свойства свежих
яиц.
_Определение активности . имеет определенное диагностическое
значение при гематологических (лейкоз, гранулематоз), нефроло-
гических, инфекционнных и эндокринных /диабет/ заболеваниях.
/6528/ В качестве стандарта для определения количества (титра)
лизоцима в испытуемом материале служит культура микрококка (ли-
зодеинтикус). /293/
_Антилизоцимная активность микробов . считается фактором пато-
генности. Высокая степень антилизоцимной активности показана
для менингококков, особенно серогрупп А, В и С. /2381к/
_Лизоцимная активность микроорганизмов
Известно, что лизоцимная активность присуща многим бактериям
(Г- и Г+). Функция - регуляция экологии бактерий. /6339/
Наиболеее выраженной лизоцимной активностью обладает
- штамм синегнойной палочки (40%).
- Патогенная кишечная палочка выделяет только от больных
(активность в 33%).
- У стафилококков внешней среды лизоцим обнаружен в 23%, а
от больных - 31%.
- 19 -
- Некоторые сальмонеллы.
2VIII. КАТИОННЫЕ БЕЛКИ
Катионные белки (фагоцитин, лейкин и др.) содержатся в азу-
рофильных и специфических гранулах нейтрофилов и высвобождаются
как в просвет лизосом, так и внеклеточно. При активации нейтро-
филов содержание белков падает. При незавершенном фагоцитозе
высвобождение затормаживается. /2723к/
_Биохимия
4Насчитывается 7 белков, обусловливающих бактерицидное дейс-
4твие. К ним относятся альфа-,бета-,L-лизины (лизоцим, лактофер-
4рин), гистоны, протамины, щелочные полипептиды.
4Катионные белки на 50% состоят из гидрофобных аминокислот и
4в избытке содержат аргинин и лизин. Некоторые из катионных бел-
4ков по своему противомикробному действию напоминают полимиксин
4В и инактивируют Г- бактерии. /7664/84/
4М. бета-лизинов - 6кД.
_ 5Содержатся .в лизосомах лейкоцитов (ткани почек, селезенке,
5легких, головного мозга, надпочечников) и тромбоцитов./272-39/
5Их нет в лизосомах других клеток.
_Свойства
- вызывают повышение проницаемости клеточной стенки бактерий
в присутствии кислорода /анаэробы устойчивы к катионным белкам/
(положительно заряженные белки сорбируются на отрицательно-за-
ряженных поверхностях); тем самым облегчается проникновение ли-
зосомальных ферментов в цитоплазму поглощаемых частиц.
1В настоящее время особо важное значение придается дефензинам
1- богатым аргинином белкам, которые обладают способностью
1встраиваться в липидный слой клетки, нарушать ее проницаемость
1и убивать широкий спектр бактерий, грибов и даже вирусов.
1/2291к/ 0 - ПОВТОР
- или вызывают агрегацию лигандов (инактивируя т.о. микроор-
ганизмы)./272/
- Щелочные полипептиды эозинофилов участвуют в лизисе пара-
зитов. /7073/
- Лактоферрин связывает железо и оказывает бактериостатичес-
кое действие (цитохромы).
Инактивируют Г- микроорганизмы ( и некоторые Г+, например,
бациллы), отчасти кандиды. /272-37/ Катионные белки высокоак-
тивны против кандид и Г+ бактерий, в то время как Е.с. и
Salm.typhimuium более устойчивы к их действию. /350/84/
Катионные белки альвеолярных макрофагов высокоактивны против
кандид и Г+ бактерий - Г+ бацилл и др. (Г- кишечная палочка и
сальмонеллы устойчивы к их действию).
_Синтез
Основными продуцентами бета-лизинов служат тромбоциты, сте-
пень разрушения которых при свертывании крови коррелирует с
возрастанием уровня бета-лизинов.
2IX. NO 5- 0 (окисел азота)
Высвобождение оксида азота (NO) из лейкоцитов, эндотелиаль-
ных, тучных клеток, нервных окончаний оказывает мощное
- микробицидное,
- цитоцидное,
- противовоспалительное,
- противоишемическое,
- противотромботическое,
- цитопротективное действие. /2734к/
Слюной поддерживается нормальный уровень генерации NO в тка-
нях полости рта. /2734к/
5Синтез происходит только в присутствии L-аргинина, который
5является исходным продуктом, подвергающимся воздействию
5NO--cинтетазы. NO- является промежуточным продуктом превращения
5L-аргинина, окончательный же продукт - NO 42 5, по уровню которого
5в моче или культуральной жидкости можно судить об интенсивности
5синтеза. /2294к/
Синтез индуцируется ФНО, ИЛ-1 и др. /2372к-х/
Альфа-ФНО активирует NO-синтетазу, вызывающей образование
NO-реактивных метаболитов. ИЛ-10 ингибирует NO-синтетазу.
/2294к/95/ Пути генерации окиси азота и супероксиданиона в фа-
гоцитах конкурентны: продукция окиси азота (опухольинфильтриру-
ющими макрофагами) сопровождается уменьшением продукции супе-
роксиданиона (в перитонеальных макрофагах наоборот). /2445к/98/
Высокая активность нитрооксид(NO)cинтетазы обнаружена в ней-
ронах. Обильную NO-ергическую иннервацию получают артериолы
подслизистой основы и слизистой оболочки пищевода.
NO-синтетаза, как фермент энергетического обмена, появляется
Реферат опубликован: 16/06/2005 (18411 прочтено)