Биотехнология, биопрепараты

Страница: 18/26

5В 1987г. американский иммунолог R.Hong разработал трехэтап-

5ную систему оценки ИС. 0 5Р.В.Петровым создан 2-этапный принцип

5оценки иммунного статуса. 0

_Выделяют 3 уровня иммунологических тестов .:

31. Первый уровень. 0 Первый этап предназначен для выявления

"грубых" дефектов иммунитета с помощью ориентировочных тестов.

- Определение лейкоцитарной формулы и общего количества лей-

коцитов в периферической крови.

- Подсчет относительного и абсолютного количества Т- и

В-лимфоцитов.

- Определение уровня иммуноглобулинов и их субклассов. Изме-

рение концентрации Ig G, Ig M, Ig A (дефицит Ig A может не соп-

ровождаться патологией. /2338к/94/)

- Оценка специфического гуморального ответа (иммунизация с

последующим определением уровня АТ).

- Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов.

- Определение активности системы комплемента.

- Кожные тесты.

- Определение морфологиии лимфоцитов.

- Рентгенография и рентгеноскопия лимфоидных органов.

32. Второй уровень. 0 /6812/84/ Тесты 2 уровня обозначают как

аналитические. К ним могут относиться практически все тесты,

позволяющие оценить функциональную активность клеток.

- Определение уровня цитокинов (фактора, ингибирующего миг-

рацию макрофагов /МИФ/, интерлейкинов, ФНО и др.) в крови и в

других биологических жидкостях.

- Анализ поверхностных маркеров субпопуляций лимфоцитов

(CD-АГ)

-- субпопуляций Т-лимфоцитов (хелперы, супрессоры, эффек-

торы);

-- опредение поверхностных иммуноглобулинов различных

классов на В-лимфоцитах;

-- количественное определение ЕКК.

- Оценка развития клеточного и гуморального иммунного отве-

та.

- Определение функциональной активности клеток ИС

-- анализ пролиферативного ответа мононуклеарных клеток на

Т- и В-митогены и специфические антигены (реакция бласттранс-

формации на митогены: ФГА, Кон А, ЛПС, митоген лаконоса; на ми-

тогены в СКЛ),

-- оценка функциональной активности В-клеток (фенотип, по-

ликлональная активация, продукция иммуноглобулинов в культуре

in vitro, антиген-специфическая стимуляция, иммунизация убитыми

вирусными вакцинами, гемоцианином или бактериофагом ФХ 174),

-- анализ цитотоксичности (NK-клетки, Т-киллеры).

--- определение активности ЕКК;

--- оценка функциональной активности Т-клеток (фенотип,

поликлональная активация митогенами, антигенами в смешанной

культуре лимфоцитов /СКЛ/, тесты Т-хелперной и Т-супрессорной

активности, антиген-специфический ответ, цитотоксическая актив-

ность, кожные тесты ГЗТ на туберкулин, стрептокиназу, кандидин

и пр.);

-- оценка функциональной активности макрофагов (адгезии и

хемотаксиса, стадий фагоцитоза и его завершенности, внутрикле-

точной инактивация Staphylococcus aureus, тест кожного окна,

хемилюминесценции).

- Количественное определение отдельных компонентов компле-

мента (субкомпонента С1q, С3, С6-С8).

- Оценка миграционной активности лейкоцитов (макрофагов,

нейтрофилов, лимфоцитов). Анализ молекул адгезии.

-- тест торможения миграции лейкоцитов на ФГА.

5- Оценка HLA.

33. Третий уровень.

- Генетический и цитологический анализ хромосомного материа-

ла.

- Определение ферментов лимфоцитов (аденозиндезаминаза, пи-

риннуклеозидфосфорилаза), ассоциированных с иммунодефицитами.

- Анализ смешанных клеточных культур с целью определения им-

муноглобулин-продуцирующей функции В-лимфоцитов.

- Гистохимический анализ лимфоидных органов.

Хорошо диагносцируются первичные (врожденные) иммунодефици-

ты, вторичные четко регистрируются при хронических патологичес-

ких состояниях.

В настоящее время нет достаточно универсального набора тес-

тов для оценки первичных и вторичных иммунодефицитов. /6812/84/

Определение уровня иммуноглобулинов не всегда полезно. Для

иммунной защиты имеет значение количество специфических анти-

тел, а не общая концентрация иммуноглобулинов сыворотки.

───────────────────────────────────────────────────────────────

3РАЗДЕЛЕНИЕ СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ

(для изучения функциональной активности,

определения HLA-АГ)

Принципы разделения:

По различным адгезивным способностям (АГ-предентирующие

клетки - моноциты и В-лимфоциты адгезируют к твердым поверхнос-

тям):

- к стеклу (стеклянным бусам), клетки отделяют от сорбента

встряхиванием),

- найлоновая вата в шприце (В-лимфоциты снимают 5-6-кратным

сдавлением ваты поршнем шприца)

- сефадекс.

2Аффинная хроматография 0 основана на избирательной сорбции

клеток различных субпопуляций к носителю, содержащему вещества,

к которым клетки данной субпопуляции имеют высокое сродство

(АГ, мембранные Ig, через "пришитые" FcR, белок А стафилокок-

ков, CR1).

- 4Желатин смешивают с АГ, покрывают центрифужные пробирки +

4суспензию лимфоцитов. С АГ связываются АОК --- нагрев до 37оС

4выход АОК. 0

4- Эритроциты нагружают белком А стафилококка + суспензия

4лимфоцитов --- связывание зрелых В-лимфоцитов. Элюция гипотони-

4ческим раствором или лизостафином.

4- Монослой эритроцитов, нагруженных ИК + суспензия лимфоци-

4тов. Свободные В-лимфоциты получают гипотоническим шоком.

4- Через CR1 В-лимфоцитов (на сефарозе-С3)

- Аффинная хроматография на колонках с лектинами; элюция

раствором углевода, по отношению к которому лектин специфичен

(отделение агглютинированных клеток центрифугированием). Связы-

вание лектина Helix pomatia Т-лимфоцитами на колонке (лектин

связывает обработанные нейраминидазой Т-лимфоциты); Клетки элю-

ируют N-ацетил-D-галактозамином.

Очищенные Т-лимфоциты можно получить путем отрицательной се-

лекции HLA-DR положительных клеток (т.е. В-лимфоцитов), разру-

шая их соответственно антисывороткой и комплементом.

Распределение Т- и В-лимфоцитов в организме

и их характеристика

──────────────────────┬───────────────────┬────────────────────

Показатель │ Т-лимфоциты │ В-лимфоциты

──────────────────────┼───────────────────┼────────────────────

Источник │Костный мозг │Костный мозг

Место формирования │Тимус │Красный костный мозг

│ │Группы лимфоидных

│ │фолликулов

1Распределение 0, % 1: 0 │ │

Красный костный мозг │ 0 │ 15

Тимус │ 100 (тимоциты) │ 0 (0,3)

ЛУ │ 60 (65) │ 20 (21)

Пейеровы бляшки │ 30 │ 60

Селезенка │ 30 (35) │ 60 (42)

Кровь │ 60 │ 20 (15)

Лимфа │ 85 │ 15

│ │

Наличие АГ │ CD4+,CD8+ │ CD19+ и др.

│ │

HLA │ I класса │ I и II классов

─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ │ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ │ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─

Локализация │ │

- в ЛУ │Паракортикальная │Центры размножения

│зона, │(зародышевые центры),

│перифолликулярное │медуллярные тяжи

│пространство │

- в селезенке │Белая пульпа, окру-│Красная пульпа,

│жающая артериолы │центры размножения

- в пейеровых │Перифолликулярная │Центр фолликула

бляшках │зона │

Рециркуляция │ │

в организме │Быстрая │Менее быстрая

Продолжительность │ │

жизни │Месяцы │Недели

│ │

Поверхность │Гладкая │Ворсинчатая

│ │

2Рецепторы к ЭБ 0 (Е-РОК)│ │

(эритроцитам барана=Е)│ + │ -

2Рецепторы к С3в 0 │ │

(ЕАС-РОК) │ - │ +

2FcR 0│ 2 - 0│ 2 +

Стимуляция синтеза ДНК│ │

Реферат опубликован: 7/04/2005 (69552 прочтено)