Страница: 18/26
5В 1987г. американский иммунолог R.Hong разработал трехэтап-
5ную систему оценки ИС. 0 5Р.В.Петровым создан 2-этапный принцип
5оценки иммунного статуса. 0
_Выделяют 3 уровня иммунологических тестов .:
31. Первый уровень. 0 Первый этап предназначен для выявления
"грубых" дефектов иммунитета с помощью ориентировочных тестов.
- Определение лейкоцитарной формулы и общего количества лей-
коцитов в периферической крови.
- Подсчет относительного и абсолютного количества Т- и
В-лимфоцитов.
- Определение уровня иммуноглобулинов и их субклассов. Изме-
рение концентрации Ig G, Ig M, Ig A (дефицит Ig A может не соп-
ровождаться патологией. /2338к/94/)
- Оценка специфического гуморального ответа (иммунизация с
последующим определением уровня АТ).
- Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов.
- Определение активности системы комплемента.
- Кожные тесты.
- Определение морфологиии лимфоцитов.
- Рентгенография и рентгеноскопия лимфоидных органов.
32. Второй уровень. 0 /6812/84/ Тесты 2 уровня обозначают как
аналитические. К ним могут относиться практически все тесты,
позволяющие оценить функциональную активность клеток.
- Определение уровня цитокинов (фактора, ингибирующего миг-
рацию макрофагов /МИФ/, интерлейкинов, ФНО и др.) в крови и в
других биологических жидкостях.
- Анализ поверхностных маркеров субпопуляций лимфоцитов
(CD-АГ)
-- субпопуляций Т-лимфоцитов (хелперы, супрессоры, эффек-
торы);
-- опредение поверхностных иммуноглобулинов различных
классов на В-лимфоцитах;
-- количественное определение ЕКК.
- Оценка развития клеточного и гуморального иммунного отве-
та.
- Определение функциональной активности клеток ИС
-- анализ пролиферативного ответа мононуклеарных клеток на
Т- и В-митогены и специфические антигены (реакция бласттранс-
формации на митогены: ФГА, Кон А, ЛПС, митоген лаконоса; на ми-
тогены в СКЛ),
-- оценка функциональной активности В-клеток (фенотип, по-
ликлональная активация, продукция иммуноглобулинов в культуре
in vitro, антиген-специфическая стимуляция, иммунизация убитыми
вирусными вакцинами, гемоцианином или бактериофагом ФХ 174),
-- анализ цитотоксичности (NK-клетки, Т-киллеры).
--- определение активности ЕКК;
--- оценка функциональной активности Т-клеток (фенотип,
поликлональная активация митогенами, антигенами в смешанной
культуре лимфоцитов /СКЛ/, тесты Т-хелперной и Т-супрессорной
активности, антиген-специфический ответ, цитотоксическая актив-
ность, кожные тесты ГЗТ на туберкулин, стрептокиназу, кандидин
и пр.);
-- оценка функциональной активности макрофагов (адгезии и
хемотаксиса, стадий фагоцитоза и его завершенности, внутрикле-
точной инактивация Staphylococcus aureus, тест кожного окна,
хемилюминесценции).
- Количественное определение отдельных компонентов компле-
мента (субкомпонента С1q, С3, С6-С8).
- Оценка миграционной активности лейкоцитов (макрофагов,
нейтрофилов, лимфоцитов). Анализ молекул адгезии.
-- тест торможения миграции лейкоцитов на ФГА.
5- Оценка HLA.
33. Третий уровень.
- Генетический и цитологический анализ хромосомного материа-
ла.
- Определение ферментов лимфоцитов (аденозиндезаминаза, пи-
риннуклеозидфосфорилаза), ассоциированных с иммунодефицитами.
- Анализ смешанных клеточных культур с целью определения им-
муноглобулин-продуцирующей функции В-лимфоцитов.
- Гистохимический анализ лимфоидных органов.
Хорошо диагносцируются первичные (врожденные) иммунодефици-
ты, вторичные четко регистрируются при хронических патологичес-
ких состояниях.
В настоящее время нет достаточно универсального набора тес-
тов для оценки первичных и вторичных иммунодефицитов. /6812/84/
Определение уровня иммуноглобулинов не всегда полезно. Для
иммунной защиты имеет значение количество специфических анти-
тел, а не общая концентрация иммуноглобулинов сыворотки.
───────────────────────────────────────────────────────────────
3РАЗДЕЛЕНИЕ СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ
(для изучения функциональной активности,
определения HLA-АГ)
Принципы разделения:
По различным адгезивным способностям (АГ-предентирующие
клетки - моноциты и В-лимфоциты адгезируют к твердым поверхнос-
тям):
- к стеклу (стеклянным бусам), клетки отделяют от сорбента
встряхиванием),
- найлоновая вата в шприце (В-лимфоциты снимают 5-6-кратным
сдавлением ваты поршнем шприца)
- сефадекс.
2Аффинная хроматография 0 основана на избирательной сорбции
клеток различных субпопуляций к носителю, содержащему вещества,
к которым клетки данной субпопуляции имеют высокое сродство
(АГ, мембранные Ig, через "пришитые" FcR, белок А стафилокок-
ков, CR1).
- 4Желатин смешивают с АГ, покрывают центрифужные пробирки +
4суспензию лимфоцитов. С АГ связываются АОК --- нагрев до 37оС
4выход АОК. 0
4- Эритроциты нагружают белком А стафилококка + суспензия
4лимфоцитов --- связывание зрелых В-лимфоцитов. Элюция гипотони-
4ческим раствором или лизостафином.
4- Монослой эритроцитов, нагруженных ИК + суспензия лимфоци-
4тов. Свободные В-лимфоциты получают гипотоническим шоком.
4- Через CR1 В-лимфоцитов (на сефарозе-С3)
- Аффинная хроматография на колонках с лектинами; элюция
раствором углевода, по отношению к которому лектин специфичен
(отделение агглютинированных клеток центрифугированием). Связы-
вание лектина Helix pomatia Т-лимфоцитами на колонке (лектин
связывает обработанные нейраминидазой Т-лимфоциты); Клетки элю-
ируют N-ацетил-D-галактозамином.
Очищенные Т-лимфоциты можно получить путем отрицательной се-
лекции HLA-DR положительных клеток (т.е. В-лимфоцитов), разру-
шая их соответственно антисывороткой и комплементом.
Распределение Т- и В-лимфоцитов в организме
и их характеристика
──────────────────────┬───────────────────┬────────────────────
Показатель │ Т-лимфоциты │ В-лимфоциты
──────────────────────┼───────────────────┼────────────────────
Источник │Костный мозг │Костный мозг
Место формирования │Тимус │Красный костный мозг
│ │Группы лимфоидных
│ │фолликулов
1Распределение 0, % 1: 0 │ │
Красный костный мозг │ 0 │ 15
Тимус │ 100 (тимоциты) │ 0 (0,3)
ЛУ │ 60 (65) │ 20 (21)
Пейеровы бляшки │ 30 │ 60
Селезенка │ 30 (35) │ 60 (42)
Кровь │ 60 │ 20 (15)
Лимфа │ 85 │ 15
│ │
Наличие АГ │ CD4+,CD8+ │ CD19+ и др.
│ │
HLA │ I класса │ I и II классов
─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ │ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ │ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─
Локализация │ │
- в ЛУ │Паракортикальная │Центры размножения
│зона, │(зародышевые центры),
│перифолликулярное │медуллярные тяжи
│пространство │
- в селезенке │Белая пульпа, окру-│Красная пульпа,
│жающая артериолы │центры размножения
- в пейеровых │Перифолликулярная │Центр фолликула
бляшках │зона │
Рециркуляция │ │
в организме │Быстрая │Менее быстрая
Продолжительность │ │
жизни │Месяцы │Недели
│ │
Поверхность │Гладкая │Ворсинчатая
│ │
2Рецепторы к ЭБ 0 (Е-РОК)│ │
(эритроцитам барана=Е)│ + │ -
2Рецепторы к С3в 0 │ │
(ЕАС-РОК) │ - │ +
2FcR 0│ 2 - 0│ 2 +
Стимуляция синтеза ДНК│ │
Реферат опубликован: 7/04/2005 (69552 прочтено)